脑中动脉阻塞（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）模型

产品描述

1 实验动物

SPF级ICR小鼠，健康雄性，6周龄，25克左右

2 实验周期

2-3个工作日

3 建模方法

1. 实验材料

眼科剪1个、眼科镊1个、弯镊1个、直镊1个、组织镊1个、持针器1个、动脉夹2个、大鼠板、碘伏棉球、酒精棉球、无菌棉签、无菌纱布、剃毛器。

手术器械

2. 麻醉方法：1 %三溴乙醇，0.3 ml腹腔注射麻醉小鼠，剃毛碘伏消毒；

                            剃毛                                                                     碘伏消毒                

3. 实验方法：

①延颈部正中间竖向剪开皮肤创口约3 cm，钝性分离肌肉层，可见底部肌肉下方有轻微搏动即为颈总动脉，分离出颈总动脉后眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经，分离出颈总动脉大约1~1.5 cm左右尽量向近心端结扎颈总动脉。

                             剪开皮肤                                          钝性分离肌肉层                                                 颈总动脉                                     近心端结扎颈总动脉            

    ②可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y字形”分布，分离出独立的两根动脉（颈外、颈内），结扎颈外动脉，颈外和颈总动脉结扎线之间备线打松结。

                                           颈内颈外与颈总动脉呈“Y”字型                              结扎颈外动脉                                             颈总动脉打活结

③动脉夹暂时夹闭颈内动脉，在备线与颈总动脉结扎处之间离Y字形分叉处约0.8 mm处用眼科剪剪一“V字形”切口。

                                                                   微动脉夹夹紧颈内动脉                                                 颈总动脉剪小口

④血管在自然状态下，用眼科镊夹持线栓缓慢进入颈总动脉，到达动脉夹时将预留的松结线稍微拉紧（防止远心端回流渗血），松开颈内动脉夹，当栓线到达Y字形分叉口附近时向颈内动脉继续插入栓线，此时栓线已进入大脑中动脉且不能继续前行。

插入线栓

⑤栓线插入完毕后将预留的结扎线拉紧固定，棉签清理颈部血块，逐层缝合皮肤碘伏棉球消毒，将大鼠放回笼子。1.5 h后，麻醉大鼠，颈部消毒，打开一个小口，用眼科镊夹住栓线固定处将栓线拔出至其头端，剪去多余栓线，逐层缝合。

缝合皮肤

4 注意事项

（1）分离颈部肌肉时，两侧小块肌肉叫鼓泡腺体，避免损伤导致出血。

（2）见到颈总动脉了要小心分离迷走神经，迷走神经会影响其呼吸而死亡的。

（3）栓线不能反复进退，否则及容易造成蛛网膜下腔出血，而且很容易误解为模型成功。

（4）鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型，梗死体积出现的最小时间点可能为 2 h，体积随时间进行性增大至12 h基本趋于稳定。

5 模型评价

5..1 神经行为学检查

LONGA评分法，神经学检查分为5个等级。

0分：正常无神经功能缺损。

1分：左侧前爪不能完全伸展，轻度神经功能缺损。

2分：行走时鼠向瘫痪侧转圈，中度神经功能缺损。

3分：行走时鼠身体向瘫痪侧倾倒，重度神经功能缺损。

4分：不能自发行走，有意识丧失。

BERDERSON评分法，姿势反射测验，提尾悬空试验 鼠提尾悬空一米观察前肢屈曲情况，正常鼠向地面伸展双上肢。分为四个等级，分值越高，说明动物行为障碍越严重。

正常： 0级，无明显症状。

轻度： 1级，前肢屈曲。

严重：2级，侧推抵抗力下降，伴前肢屈曲。

重度：3级，侧推抵抗力下降，伴前肢屈曲，有自发性旋转。

5.2 形态学观察

TTC染色步骤：

将脑立即置于-20 °C冰箱冷冻10 min， 用锋利双面剃须刀片按约2 mm厚度，在距额、枕极2 mm间做连续冠状切片，共取5-6个脑片，滤纸覆盖脑表面将脑片放置到含0.5 % TTC的培养皿内，37 °C恒温培养箱避光染色 20 min，注意不时翻动脑片，以使染色均匀，正常组织中的脱氢酶反应，产生深红色使正常组织呈玫瑰红色，缺血組织内线粒体损伤、脱氢酶活性下降，不能诱导染色反应而呈苍白色。

6模型应用

大脑中动脉阻塞（MCAO）模型适用于局灶性脑缺血及相关药物的研究。

7补充说明

本实验是以ICR小鼠为基础制备的模型，若需要其他动物模型需要跟我司联系确定详细报价。